Rostlinné tomosyny a jejich funkce v sekreci

Abstract

Tomosyn is a protein belonging to the Lgl family and conserved across the animal and plant kingdom. Tomosyn is composed of N-terminal domain containing WD40 motif and Cterminal domain, where the R-SNARE motif is located at the end of the C-terminal domain. This motif is classified as homologous to R-SNARE motif of synaptobrevine, which is a protein located on the surface of the vesicles and participating in the formation of SNARE complex and subsequent fusion of the vesicles with the plasma membrane. Thus the role of this tomosyn is mainly the regulation of exocytosis. Apart from the animal tomosyn, its yeast homolog Sro7/Sro77 is also examined, however during the evolution it has lost its R-SNARE motif and therefore the plant tomosyns remain unexplored. The aim of this diploma thesis was to characterize both of the plant tomosyns: AtTYN1 and AtTYN2 in Arabidopsis thaliana plant. The experimental thesis included the bioinformatic analysis, the DNA construct creation, a search for interactors by yeast two-hybrid system and monitoring the localization using the confocal microscope. The bioinformatic analysis results, including the creation of phylogenetic tree, not only revealed the conservation of tomosyns across the different classes, but also the division of both tomosyns into different clusters. There was...

Tomosyn je protein patřící do rodiny Lgl, zároveň je konzervovaný napříč živočišnou i rostlinnou říší. Skládá se z N cího se na povrchu váčků a účastnícího se tvorby SNARE komplexu a následného fúzování váčků s plazmatickou membránou. Rolí tomosynu je tak zejména regulace exocytózy. Kromě živočišného tomosynu je prostudován jeho kvasinkový průběhu evoluce svůj R tomosyny tak zůstávají neprobádanou oblastí. Cílem této práce bylo charakterizovat oba u, tvorbu DNA konstruktů, hledání interaktorů pomocí Výsledky bioinformatické analýzy, jehož součástí bylo vytvoření fylogenetického stromu, příč různými třídami rostlin a rozdělení obou tomosynů do odlišných klastrů. V klastru s homologem AtTYN2 se nenacházel ani jeden zástupce výtrusných rostlin. Z obou tomosynů byl konfokálním mikroskopem sledován a lokalizován l v cytoplasmě. Dvouhybridní kvasinkový systém neodhalil interaktory ani v jednom z rostlinných tomosynů.